蛋白質保存方法你知多少

　　蛋白質的保存是一個比較棘手的問題，分子生物學實驗室的童鞋們或多或少都會碰到。
 

　　有沒有遇到過，不同批次純化的蛋白，采用同樣的測試方法，活性卻不太一樣？
 

　　有沒有遇到過新純化的蛋白，從冰箱拿出融化后，居然沉淀了？
 

　　蛋白質純化后，保存方式都有哪些呢？
 

　　一、謹記蛋白質的保存原則
 

　　低溫、分裝、濃縮、速凍/速融、添加劑
 

　　二、保存方法你知多少
 

　　蛋白質的的保存方法的選擇取決于蛋白質的穩定性以及保存后什么時候再次使用你的蛋白。
 

　　1、如即提即用的話，可將濃縮蛋白質儲存在單一溶液(如PBS)，置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。
 

　　優點：蛋白容易獲得，可以快速進行實驗，且同一管樣品可重復取樣，這樣避免了因經常解凍而加速蛋白的降解。
 

　　缺點：可能會面臨微生物污染，蛋白質失活和氧化，可能對實驗數據的均一性造成影響。要避免這種情況，可以把蛋白質分成小份儲存，并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等。但也要根據自己蛋白的情況，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內存在二硫鍵，為保證其完整性，應該存儲在氧化環境中。另外，儲存時間超過一個月的蛋白可以考慮扔掉。
 

　　2、透析到合適的緩沖液中可以凍干，放4°保存；也可加高濃度的硫酸銨(你的蛋白不沉淀的話)，4°保存。
 

　　注意：你要注意加入硫酸銨后pH會下降一些，你的緩沖液可不能太接近蛋白的等電點啊，蛋白在等電點附近沉淀很多時候是不可復溶，即使復溶活性也不能保證。
 

　　3、純化后的蛋白測濃度后，加入50%甘油，確認混勻后分裝，液氮速凍，放入-20度或-80度保存，尤其適用于酶類。
 

　　優點：在低溫下，蛋白質對微生物污染，蛋白酶降解和氧化反應更有抵抗力，容易保證其活性。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中，可以方便取樣。此外，這種方式儲存的蛋白質可以保存長達一年，對于抗體軛合物是一個好的選擇。
 

　　缺點： 蛋白質在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，如果蛋白對還原性環境要求比較高，也需加入抑制劑、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護劑中有時是不可取的，取決于你接下來要做的實驗。
 

　　4、有些蛋白可以不加甘油，直接液氮速凍幾分鐘，-80度保存。
 

　　優點：可以長期保存(多年)，不需要甘油、*等化學物質，避免蛋白質降解或微生物污染。
 

　　缺點：冷凍蛋白質應一次性使用，為了避免反復凍融發生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復合物)冷凍后可能會失活。
 

　　5、長期保存蛋白質的另一個方式是凍干(lyophilization)。
 

　　優點：蛋白質凍干后會呈現蓬松的白色粉末形式，處于脫水的狀態，可以在冰箱中無限期保存。
 

　　缺點：對于某些蛋白質，凍干操作有一個潛在問題就是蛋白質不能復溶。凍干/復溶的過程同樣會對蛋白質產生一定的傷害作用。
 

　　三、這些重點你要知道
 

　　1、保證恒定的pH值，一般PBS最為常用；
 

　　2、保證一定的蛋白濃度，如果濃度比較稀的話，可以考慮添加一定量的BSA；
 

　　3、甘油的添加也能在很大程度上提高抗體的穩定性；
 

　　4. 為了防腐可以添加一定量的*(辣根過氧化物酶偶聯的二抗一般不能加)，如果樣品要用于生物學檢測，避免使用防腐劑。
 

　　5、無論是冷凍還是儲存在溶液中，將蛋白進行分裝，以避免凍融，降低污染的風險。
 

　　6、進行蛋白質操作實驗時一定要帶手套，們的皮膚上有一些蛋白酶，這些蛋白酶很可能會降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學分子也可能會污染蛋白樣品。另外，為了防止細菌的生長，蛋白質最好保存在滅菌的小管中。
 

　　7、避免反復凍融或凍干重溶解過程，這樣很可能會降低生物活性。
 

　　8、避免震蕩，震蕩產生的剪切力有可能會對蛋白質產生破壞作用。震蕩時溶液中會產生氣泡，氧氣的進入會導致蛋白質處在氧化環境中。蛋白質中含有半胱氨酸，其極易被氧化為胱氨酸，這一過程很可能會破環蛋白質的活性。